Mimořádné přínosy ultrasenzitivní ELISA s cyklováním thio-NAD při určování proteinu Dengue NS1
1. Úvod
Horečka dengue je akutní infekční onemocnění způsobené Virus dengue kousnutím infikovaného druhu Aedes (Ae. aegypti nebo Ae. albopictus) komára, s hlavními příznaky jako vysoká horečka, závratě, bolest hlavy, vyrážka a těžké Bolesti (bolest očí, svalů, kloubů nebo kostí) atd. Tato nemoc je široce rozšířená v tropickém a subtropickém klimatu. Odhaduje se, že každý rok je nakaženo 100 až 400 milionů lidí, přičemž více než 80 % je obvykle mírných a bez příznaků. Přesto může těžká horečka dengue zvýšit riziko úmrtí, pokud není správně léčena. Včasná diagnostika tohoto onemocnění je proto důležitá pro její včasné léčení.Je pozoruhodné, že nestrukturální protein 1 (NS1), vysoce konzervovaný glykoprotein, se během infekce vylučuje především Dengue Virus, který je intenzivně považován za hlavní patogenezní faktor Horečka dengue. Proto se NSI obecně používá jako biomarker pro včasné odhalení tohoto onemocnění.
In thje study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) v kombinaci s Thio nikotinamid adenin dinukleotid (thio-NAD/S-NAD) Metoda cyklování (dále označováno jako ultrasenzitivní ELISA) se využívá k detekci NSI, následované porovnáním s NAAT pro potvrzení přesnosti detekce.
2. Výhody a nevýhody tradičních detekčních metod pro Horečka dengue
V současnosti je tZde jsou čtyři hlavní metody detekce pro Horečka dengue.
Izolace virů a identifikace mají vysokou specificitu, ale jsou časově náročné a trvají alespoň 5 dní. The Rychlý antigen Test je nejrychlejší a nejefektivnější z ostatních metod, ale citlivost a specificita jsou relativně nízká. Sérologický test založený na IgM a IgG je omezen počet dní infekce, jako the Test musí být odložen až do dosažení hladiny protilátek stoupá na zeznatelnou úroveň.
V praxi se často používá NAAT k určení Horečka dengue Hlínou s vysokou citlivostí a specificitou. Tato metoda je však nákladná, namáhavá a náchylná k falešné pozitivnosti, kterou musí provádět vyškolený personál. Aby se překonaly nevýhody těchto metod, je použita nová metoda detekce ultrasenzitivní ELISA je aplikované v této studii.
3. Pracovní postup ultrasenzitivní ELISA s cyklováním thio-NAD
Dvojice protilátek je používá se k zachycení proteinu NS1 v sendvičové ELISA a alkalické fosfatázy je labeled on the secondary antibody. Aside from the antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH jsou používá se ke konstrukci systému cyklování thio-NAD enzymů. Během cyklické reakce thio-NAD se thio-NADH neustále hromadil v trojúhelníkovém čísle a mohl být přímo měřen při absorpci 405 nm.
4. Srovnání ultrasenzitivních ELISA a NAAT při detekci proteinu Dengue NS1
V NAAT je 60 vzorků pozitivních na dengue a 25 na dengue negativních. Hodnota cyklického prahu (CT) NAAT u těchto vzorků pozitivních na dengue se pohybovala od 12,42 do 31,41. V ultrasenzitivní ELISA je 59 vzorků odpovídajících výsledkům NAAT pozitivních, zatímco 25 vzorků je zcela odpovídajících výsledkům NAAT.Ve srovnání s NAAT je citlivost a specifita ultrasenzitivní ELISA 98,3 % a 100 % (Tabulka 2). Ze 60 pacientů pozitivních na dengue potvrzených NAAT je pouze jeden vzorek negativní v ultrasenzitivní ELISA. Data NAAT ukázala, že vzorek je typ 4 infekce DENV s CT hodnotou 21,59. Výsledky ultrasenzitivní ELISA jsou téměř v dokonalé shodě s výsledky NAAT, s kappa hodnotou 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).
5. Závěr
UMetoda ltrasensitivní ELISA je snadná na provedení a nevyžaduje žádné profesionální stážjety. TDetekce HE může být zahájena ihned po získání malého vzorku. Je zvláště vhodný pro včasné odhalení Dengue Nemoc v Země s nízkými příjmy.Reference
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method pro Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Výhody a vlastnosti produktu BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC je oJeden z mála podniků v Čína který může produkovat Thio-NAD, s “Bonzyme” Celýenzymatická metoda (šetrné k životnímu prostředí; žádné škodlivé zbytky rozpouštědel) a unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, s vlastní továrny a řada mezinárodních certifikací, které zajišťují vysokou kvalitu a stabilní dodávky produktů.
