Kvantifikace NAD+ a jeho metabolitů v myších sedacích nervech
Úvod
Klíčové části nikotinamidadenindinukleotidu (NAD+) a jeho metabolitů při stárnutí a neurodegeneraci jsou široce uznávány. Pro urychlení pokroku směrem k biochemickému výzkumu a intervencím zaměřeným na stárnutí a neurodegenerativní onemocnění je velmi důležité přesně kvantifikovat NAD+ a hladiny jeho metabolitů v záchranné cestě NAD+. Zde je použita robustní a přesná metoda LC-MS/MS ke kvantifikaci hladin NAD+ a jeho metabolitů v normálním a poraněném myším sedacím nervu.
Omezení stávajících metod pro kvantifikaci NAD+ a jeho metabolitů
Tradiční metody kvantifikace NAD+ a jeho metabolitů, jako je HPLC-UV, NMR, kapilární zónová elektroforéza nebo kolorimetrické enzymatické testy, čelí různým výzvám v citlivosti, selektivitě a nepřímém měření. Pokud jde o stávající LC-MS/MS testy pro měření buněčného nebo tkáňového NAD+ a jeho metabolitů, stále je třeba překonat mnoho obtíží, jako je prodloužená doba běhu, špatné chování chromatografické retence a neuspokojivé tvary píků. Kromě toho lze těmito metodami pokrýt pouze jednu až tři látky v záchranném způsobu NAD+.
Modifikace metody LC-MS/MS
Na základě existujících LC-MS/MS testů jsou prováděny modifikace týkající se chromatografických podmínek, náhradní matrice a podmínek MS/MS. Konkrétně se jako přísada do mobilní fáze používá 5 μM kyseliny methylenfosfonové, která výslovně podporuje intenzitu signálu a tvar píku. Vzhledem k relativně čisté a jednoduché povaze nikdy neexistujících vzorků a jejich malé velikosti je ultračistá voda testována jako náhradní matrice. Místo hydrofilní interakční kapalinové chromatografické kolony a hypersacharidové kolony je využívána kolona Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, jejíž unikátní vysoce výkonná povrchová technologie MaxPeak HPS (pasivace vnitřní stěny kolony, eliminace kovového povrchu) umožňuje vysokou reprodukovatelnost, špičkovou symetrii a základní separaci všech analytů.Kromě toho jsou podmínky MS optimalizovány tak, aby minimalizovaly interferenční signál NAD+ v kanálu cyklické adenosindifosfátribózy (cADPR) při zachování odezvy cADPR a nikotinamidového mononukleotidu (NMN), s napětím 4000 V pro napětí iontového spreje, 450 °C pro teplotu turbotopení, 50 psi pro plyn 1, 50 psi pro plyn 2, 30 psi pro záclonový plyn a 12 psi pro kolizní plyn.
Reprezentativní chromatogram vzorků nervů (normální vs. poraněný)
Všech pět analytů dosahuje výchozí separace, kde cADPR je citlivým biomarkerem v modelu neurodegenerace. Zde axotomie sedacího nervu indukuje axonální degeneraci, což vede ke snížení hladiny NAD+ a zvýšené hladině NMN v poraněných nervech, což má za následek přibližně 2násobné zvýšení poměru NMN/NAD+. Současně jsou hladiny nikotinamidu (NAM) a adenosindifosfátu ribózy (ADPR) sníženy přibližně 2krát, zatímco hladina cADPR je zvýšena více než 8krát. Tyto výsledky jsou v souladu s výsledky dříve hlášeného výzkumu, který ověřuje přesnost této modifikované metody LS-MS/MS při kvantifikaci NAD+ a jeho metabolitů.
Závěr
Tato modifikovaná metoda LC-MS/MS umožňuje efektivní základní separaci NAD+, NMN, NAM, ADPR a cADPR během krátké doby trvání 5 minut, což přispívá k včasné diagnostice různých neurologických poruch a vývoji léků na stárnutí a neurodegenerativní onemocnění.
Odkaz
Ma Y, Deng L, Du Z. Vývoj a validace metody LC-MS / MS pro kvantifikaci NAD + a souvisejících metabolitů v myších sedacích nervech a její aplikace na zvířecí model poranění nervů. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC se od roku 2012 věnuje výzkumu a vývoji, výrobě a prodeji surovin pro koenzym a přírodní produkty, s vlastními továrnami, více než 170 globálními patenty a silným výzkumným a vývojovým týmem. BONTAC má bohaté zkušenosti s výzkumem a vývojem a pokročilou technologii v oblasti biosyntézy NAD a jeho prekurzory (např. NMN a NR). Je třeba vybrat různé typy NAD, které zahrnují NAD ER Grade (odstranění endoxinu), NAD Grade I (IVD/doplněk stravy/kosmetický surový prášek), NAD Grade II (API/meziprodukty) a NAD Grade IV (pokud existuje vyšší požadavek na rozpustnost), které mohou být poskytnuty ve formě lyofilizovaného prášku nebo krystalického prášku. Čistota BONTAC NAD může dosáhnout i nad 98 %.
Zřeknutí se
Tento článek je založen na referenci v akademickém časopise. Příslušné informace jsou poskytovány pouze pro účely sdílení a učení a nepředstavují žádné lékařské poradenské účely. Pokud dojde k nějakému porušení, kontaktujte autora a požádejte ho o smazání. Názory vyjádřené v tomto článku nereprezentují postoj BONTAC. BONTAC za žádných okolností nenese žádnou odpovědnost za jakékoli nároky, škody, ztráty, výdaje nebo náklady vyplývající nebo vyplývající přímo nebo nepřímo z vašeho spoléhání se na informace a materiály na této webové stránce.