Mimořádné přednosti ultrasenzitivní ELISA s Thio-NAD cyklováním při stanovení proteinu dengue NS1

1. Úvod

Horečka dengue je akutní infekční onemocnění způsobené Virus denguekousnutím infikovaného komára druhu Aedes (Ae. aegypti nebo Ae. albopictus), s hlavními příznaky, jako je vysoká horečka, závratě, bolesti hlavy, vyrážka a Hrozněbolesti (bolest očí, svalů, kloubů nebo kostí) atd. Toto onemocnění je široce rozšířené v tropickém a subtropickém podnebí. Odhaduje se, že každý rok se nakazí 100 až 400 milionů lidí, přičemž více než 80 % z nich je obvykle mírných a asymptomatických. Nicméně těžká horečka dengue může zvýšit riziko úmrtí, pokud není správně léčena. Včasná diagnóza tohoto onemocnění je tedy důležitá pro jeho včasnou léčbu.

Pozoruhodné je, že nestrukturální protein 1 (NS1), vysoce konzervovaný glykoprotein, je vylučován hlavně během infekce Dengue virus, který je intenzivně považován za hlavní patogenezní faktor Horečka dengue. Proto se NSI obecně používá jako biomarker pro včasnou detekci tohoto onemocnění.

V této studii byl proveden sendvičový enzymový imunosorbentní test(ELISA)v kombinaci s thio nikotinamidadenindinukleotid (thio-NAD/S-NAD) cyklická metoda (dále označovaný jako ultrasenzitivní ELISA) se používá k detekci NSI, po kterém následuje srovnání s NAAT pro potvrzení přesnosti detekce.

2. Výhody a nevýhody tradičních detekčních metod pro Horečka dengue 

V současné době tZde jsou čtyři hlavní metody detekce pro Horečka dengue.


Izolace a identifikace viru mají vysokou specificitu, ale jsou časově náročné, trvají nejméně 5 dní. Rychlý antigenní test je nejrychlejší a nákladově nejefektivnější mezi ostatními metodami, ale citlivost a specificita jsou relativně nízké. Sérologický test založený na IgM a IgG je omezen počtem dní infekce, protože ten Test musí být odložen, dokud hladina protilátek nestoupne na detekovatelnou úroveň.

Na klinice se NAAT často používá ke stanovení Horečka denguešpínou jeho vysoké citlivosti a specificity. Tato metoda je však drahá, pracná a náchylná k falešné pozitivitě, kterou musí provádět vyškolený personál. K překonání nevýhod těchto metod byla zavedena nová detekční metoda ultrasenzitivní ELISA je Aplikováno v této studii.

3. Pracovní postup ultracitlivé ELISA s thio-NAD cyklováním

Pár protilátek jeslouží k záchytu proteinu NS1 v sendvičové ELISA a alkalické fosfatázy jeoznačené na sekundární protilátce. Kromě protilátek je to derivát androsteronu, 3α-hydroxysteroid dehydrogenáza, thio-NAD a NADH arpoužívá se ke konstrukci systému cyklování enzymů thio-NAD. Během cyklické reakce thio-NAD se thio-NADH neustále hromadil v trojúhelníkovém čísle a mohl být přímo měřen při absorbanci 405 nm.

4. Srovnání ultrasenzitivních ELISA a NAAT při detekci proteinu NS1 horečky dengue

V NAAT je 60 vzorků pozitivních na horečku dengue a 25 na horečku dengue. Hodnota prahu cyklické horečky NAAT (CT) těchto vzorků pozitivních na horečku dengue se pohybovala od 12,42 do 31,41. V ultrasenzitivní ELISA je 59 vzorků odpovídajících pozitivním výsledkům NAAT, zatímco 25 vzorků je zcela odpovídajících výsledkům NAAT.

Ve srovnání s NAAT je senzitivita a specificita ultrasenzitivní ELISA 98,3 % a 100 % (tabulka 2). Z 60 vzorků pacientů pozitivních na horečku dengue potvrzených NAAT je pouze 1 vzorek negativní v ultrasenzitivní ELISA. Data NAAT ukázala, že vzorek je případ infekce DENV typu 4 s hodnotou CT 21,59. Výsledky ultrasenzitivní ELISA jsou téměř v dokonalé shodě s výsledky NAAT, s hodnotou kappa 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).

5. Závěr

Ultracitlivá metoda ELISA je snadno proveditelná a nevyžaduje obsluhu žádných profesionálních stážistů. Detekce může být zahájena ihned po obdržení malého vzorku. Je vhodný zejména pro včasné odhalení onemocnění dengue v zemích s nízkými příjmy.

Odkaz

Chen, Po-Kai a kol. "Pokročilá metoda detekce proteinu NS1 dengue pomocí ultrasenzitivní ELISA s cyklováním thio-NAD." Viry, sv. 15,9, 1894. 8. září 2023, doi:10.3390/v15091894

Výhody a vlastnosti produktu BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC je ojedním z mála podniků v Čínakterý může produkovat Thio-NADs "Bonzyme"Celoenzymatická metoda(šetrné k životnímu prostředí;Žádné škodlivé zbytky rozpouštědel) a unikátní sedmistupňová technologie čištění "Bonpure". BONTAC propojuje výzkum a vývoj, výrobu a prodej s vlastní továrny a řada mezinárodních certifikací pro zajištění vysoké kvality a stabilních dodávek produktů.

Zřeknutí se

BONTAC nenese žádnou odpovědnost za jakékoli nároky vyplývající přímo nebo nepřímo z vašeho spoléhání se na informace a materiály na této webové stránce.